En el siglo XVI empieza la época de gloria para la Universidad. De entre sus catedráticos y estudiantes, nace la Escuela de Salamanca, en la que profesan Fray Luis de León, Francisco de Salinas, Francisco de Vitoria….
Hacia 1530 se publica el Lazarillo de Tormes. Con la Celestina es una de las obras cumbres de la literatura española (que por otro lado han dado nombre a dos oficios, el de Lazarillo y el de Celestina).
También en este siglo se empiezan las obras de la Catedral Nueva (1533) lo que demuestra la pujanza económica de la ciudad.
